ELISA試劑盒也稱為酶聯(lián)免疫試劑盒,是酶免疫測定技術(shù)中應(yīng)用zui廣的技術(shù)。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,使酶標記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的elisa酶聯(lián)免疫吸附試驗有雙抗體夾心法和間接法,前者用于檢測大分子抗原,后者用于測定特異抗體。
在ELISA試劑盒中一般有3次加樣步驟,即加標本,加酶結(jié)合物,加底物。加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部,防止加在孔壁上部,并注意不行濺出,不行產(chǎn)生氣泡。加標本一般用微量加樣器,按規(guī)則的量參加板孔中。每次加標本應(yīng)更換吸嘴,以免發(fā)作交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。
有此測定(如間接法ELISA試劑盒)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液,再在其中參加血清標本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以確?;旌?。加酶結(jié)合物使用液和底物使用液時可用定量多道加液器,在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響,即加標本和加酶結(jié)合物后。
在ELISA試劑盒實驗室,對試劑準備一般不太注意,通常的做法是,在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時間不夠的問題,其直接的后果是對一些弱陽性標本的檢測出現(xiàn)假陰性。