透析已成為生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室簡便常用的分離純化技術(shù)之一。在生物大分子的制備過程中,除鹽、除少量有機(jī)溶劑、除去生物小分子雜質(zhì)和濃縮樣品等都要用到透析的技術(shù)。
即用型透析袋扁平寬度為23mm~50mm不等,為防干裂,出廠時(shí)都用10%的甘油處理過,并含有極微量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì),它們對蛋白質(zhì)和其它生物活性物質(zhì)有害,用前必須除去??上扔?0%乙醇煮沸1小時(shí),再依次用50%乙醇、0.01mol/L碳酸氫鈉和0.001mol/LEDTA溶液洗滌,后用蒸餾水沖洗即可使用。實(shí)驗(yàn)證明,50%乙醇處理對除去具有紫外吸收的雜質(zhì)特別有效。使用后的透析袋洗凈后可存于4℃蒸餾水中,若長時(shí)間不用,可加少量NaN2,以防長菌。洗凈涼干的透析袋彎折時(shí)易裂口,用時(shí)必須仔細(xì)檢查,不漏時(shí)方可重復(fù)使用。
通常是將半透膜制成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi),將即用型透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內(nèi),而鹽和小分子物質(zhì)不斷擴(kuò)散透析到袋外,直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達(dá)到平衡為止。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為“保留液”,袋(膜)外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。透析的動(dòng)力是擴(kuò)散壓,擴(kuò)散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度,還正比于膜的面積和溫度,通常是4℃透析,升高溫度可加快透析速度。
即用型透析袋使用步驟如下:
1、把即用型透析袋剪成適當(dāng)長度(10cm左右)的小段。
2、用溫水(60℃以內(nèi))浸泡一小時(shí)左右。
3、用蒸餾水*清洗透析袋3次。
4、不使用的透析膜放回自封袋中,密封保存,接觸透析膜過程中必須戴手套。
5、使用時(shí),一端用下沉透析袋夾子夾緊,灌滿水后,用手指適當(dāng)加壓,檢查不漏,方可裝入樣品。通常要留三分之一至一半的空間,以防透析過程中,袋外的水和緩沖液過量進(jìn)入袋內(nèi)將袋漲破。裝完樣品后,用上浮夾子夾緊袋口,可在袋內(nèi)放一玻璃珠,以使透析袋處于懸浮狀態(tài),即可進(jìn)行透析(詳見透析袋裝置簡圖)。為了加快透析速度,除多次更換透析液外,還可使用磁力攪拌器。透析的容器要大一些,可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。