NEB內(nèi)切酶并不兼有甲基化酶的活性。細(xì)胞內(nèi)可另有獨(dú)立的甲基化酶，它切斷DNA時(shí)不需ATP,也不需SAM。它的切點(diǎn)是嚴(yán)格的，而且就在識(shí)別順序之中。Ⅱ型的酶在蛋白質(zhì)組成上比Ⅰ型、Ⅲ型要簡(jiǎn)單的多，它只有單一的亞基，以二體或四體發(fā)揮作用。有的酶要5或 7個(gè)甚至更長(zhǎng)的識(shí)別順序。識(shí)別順序短的在DNA分子上出現(xiàn)的幾率多，酶可把DNA分子切成較多的小片段識(shí)別順序長(zhǎng)的則往往只切出少數(shù)大片段。這些酶切片段統(tǒng)稱為限制性片段。用傳感器感知外界環(huán)境、分析外界條件，然后通過適當(dāng)?shù)姆绞絹砝斫猸h(huán)境，對(duì)于工作在復(fù)雜或非常規(guī)化環(huán)境中的自主式AGV，要進(jìn)一步提高其自主判斷能力，依靠自身模式識(shí)別及障礙物識(shí)別，實(shí)現(xiàn)正常工作。

    在PCR產(chǎn)物兩端設(shè)計(jì)一定的限制酶切位點(diǎn)，經(jīng)NEB內(nèi)切酶切后克隆至用相同酶切的載體中。但實(shí)驗(yàn)證明，大多數(shù)限制酶對(duì)裸露的酶切位點(diǎn)不能切斷。必須在酶切位點(diǎn)旁邊加上一個(gè)至幾個(gè)保護(hù)堿基，才能使所定的限制酶對(duì)其識(shí)別位點(diǎn)進(jìn)行有效切斷。酶切位點(diǎn)（內(nèi)切酶的識(shí)別序列）要加在引物端，為保證PCR產(chǎn)物能被限制性內(nèi)切酶的識(shí)別且有效的酶切，一般在引物的端酶切位點(diǎn)側(cè)邊加上保護(hù)堿基。