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K1622逆轉(zhuǎn)錄酶的原理介紹

更新時間:2017-11-27 點擊次數(shù):1362次
    有些K1622逆轉(zhuǎn)錄酶還有DNA內(nèi)切酶活性,這可能與病毒基因整合到宿主細胞染色體DNA中有關(guān)。反轉(zhuǎn)錄酶的發(fā)現(xiàn)對于遺傳工程技術(shù)起了很大的推動作用,目前它已成為一種重要的工具酶。用組織細胞提取mRNA并以它為模板,在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下,合成出互補的DNA,由此可構(gòu)建出cDNA文庫,從中篩選特異的目的基因,這是在基因工程技術(shù)中zui常用的獲得目的基因的方法。本酶是通過點突變使RNaseH活性缺失,所以它具有的DNA聚合酶的活性與野生型相同,同時其延伸能力也有顯著提高。逆轉(zhuǎn)錄酶一個活性單位定義為在37℃,10min條件下,使1nmol的脫氧核糖核酸摻入酸性沉淀物質(zhì)所需的酶量。
 
    M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶比AMV反轉(zhuǎn)錄酶缺乏連續(xù)性,因此要獲得像AMV反轉(zhuǎn)錄酶反應中產(chǎn)生同樣量的cDNA就要求使用較多單位的M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶。用1微克的mRNA起始合成*條鏈的cDNA,要用8單位的M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶才相當于1單位的AMV反轉(zhuǎn)錄酶的作用。通常情況下,細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄映由DNA到RNA的,所得RNA為信使RNA供蛋白質(zhì)合成作模板用。而在部分RNA病毒中,要實現(xiàn)自身擴增,必須具有DNA,因此先由RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA再由cDNA轉(zhuǎn)錄出RNA。K1622逆轉(zhuǎn)錄酶可用RT—PCR,將RNA轉(zhuǎn)變?yōu)镈NA后擴增,以獲得RNA的序列。
 
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021-65672052
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